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php用dre打开技巧_黑科技实现单个神经元进行开或关

访客 2024-11-06 0

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要理解基因在不同大脑构造中的功能,就须要高时空精度来操纵基因表达。
此外,大脑中神经环路的研究越来越受到广泛关注,特殊是针对某一种类型的神经元。

大脑中神经环路是繁芜的,是由大量具有分子、解剖和生理特性不同的相互连接的神经元组成。
标记特定类型神经元并研究其功能的最有效方法依赖于遗传学。

php用dre打开技巧_黑科技实现单个神经元进行开或关

利用重组酶的转基因或病毒表达可进行特定的基因润色,也可以通过降落病毒剂量来实现稀疏的神经元标记。
但是用这些方法实现的遗传润色是随机的,并且难以定向到特定的目标细胞。
目前已有研究光勾引cre酶表达后调控基因的表达,这紧张是依赖于新涌现的光勾引位点特异性DNA重组酶技能。
Cre重组酶可催化DNA重组酶loxP位点之间的位点,常日用于打开或关闭基因表达。

php用dre打开技巧_黑科技实现单个神经元进行开或关
(图片来自网络侵删)

2020年3月23日美国艾伦脑科学研究所AliCetin团队在Nature Methods杂志上揭橥文章开拓了新型光勾引Cre酶系统,可在单细胞水平上靶向进行基因润色。

研究职员将Cre酶的N末端片段领悟到VVD单体(光敏真菌蛋白被用于光勾引的cre酶系统)的N端,Cre的C末端到另一个VVD单体的C末端,这样在光激活下Cre酶的N末端和C末端发生结合后被激活,这种重组蛋白称为CreV。
基于这个事理,他们又将其进行拓展,将cre酶位点更换成Dre酶位点,形成DreV蛋白,这个别系称为RecV系统。
与此同时,研究职员也对Flp重组酶进行筛选,选择高效率的Flp重组酶,以便于更好的进行交叉基因组润色。
采取这个别系,光激活5min基因润色后开始起效,1小时后达到高峰。

RecV系统有什么优点呢?首先表示在标记的整体性和特异性上:通过向Dre小鼠的尾静脉注射可跨血脑樊篱的AAV-PHP.eB-Syn-NDreV(含有DreV蛋白质粒的病毒)在单光子或双光子激活下可实现全脑神经元的标记。
除了能够实现全脑的光激活基因润色,也可以对特定类型的神经元实现。

其次表现在物种上,这种RecV系统不仅可以小鼠中利用,比如斑马鱼。
再次表现在组织类型上,这种RecV系统不仅仅很好的表达在神经元上,在心脏、皮肤、肌肉等外周组织中也能够表达。

最主要一点便是,与目前通过他莫昔芬等药物勾引的基因调控技能比较,RecV系统具有很好的时空分辨率,普通一些来说便是你想在什么时候、在什么脑区标记什么类型的神经元都是可以的,冲破了韶光界线。

此外,RecV系统也很良心了,居然可以实现稀疏标记,知足对付形态学剖析的需求。
他们将含NCreV的病毒注射到Ai139小鼠中,进行稀疏但强烈的荧光表达,通过与华中科技大学骆清铭院士(现为海南大学校长)互助,利用fMOST技能,对这些标记的神经元进行全脑轴突投射重构。

目前很少能够在单细胞水平进行基因调控的。
研究职员利用这套RecV系统进行单细胞的精准调控,详细是怎么是实现的呢?他们向Ai-14小鼠的低级视觉皮层中注射rAAV -iCreV 和rAAV- tdTomato 的稠浊病毒,第一阶段对单个表达绿色荧光的神经元进行双光子激活,可以看到仅仅该神经元表达tdTomato;第二阶段对该区域大部分的神经元进行光激活,可以看到大部分神经元表达tdTomato

这就表明可以通过双光子激活实现单个神经元精准调控。
同时,RecV系统可与钙指示剂联用,实现神经元功能成像。
纵然目前环球最精准的计策导弹也存在一定的偏差,那么RecV系统的偏差是多大?由于双光子的激光能量较大(对付单个细胞而言),因此会勾引周围的神经元表达荧光,详细来说,靶细胞10 µm半径内可引起18%神经元的非特异性表达,靶细胞半径10–50 µm内这一比例为6–7%。

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