你知道吗？血球计数板自18世纪首次被运用于剖析人的血液样本以来，逐渐发展为实验室细胞计数的标准工具。由于其操作大略，对实验环境哀求不高，只要有一台显微镜即可进行细胞计数操作。但如果想利用它得出较为精准的结果则对操作者的哀求很高，由于在操作时可能会带来各种偏差：
1、计数操作引入偏差
血球计数板利用步骤较为繁芜，计数结果的准确度不仅和上样后铺满计数池的均匀程度干系，同时浓度较高时的镜下计数难度较大，不同操作者之间的计数差异乃至高达52%，纵然同一个人的操作差异仍有可能达20%[1]。以是须要在实际计数过程中，同一操作者在相同的条件下进行多次计数以减小偏差[2]。
2、打算过程引入偏差
通过血球计数板获取的数据结果，须要在镜下一边计数一边记录，再对结果通过一系列的打算，从而转化成实际的细胞浓度数据，然后计入细胞原液的稀释倍数（如台盼蓝的稀释等），即可得到目的细胞样品的浓度。打算过程中的偏差也会影响到终极的实验结果[3]。
3、样品制备引入偏差
首先，均匀细胞悬液样本的准备对计数结果的准确性至关主要。对付某些极易聚团或未能均匀打散的细胞悬液，人工计数时，每每不易识别导致偏差被放大。其次，依据大多数实验室的习气，常日会采纳对四个顶角的大格内的细胞进行统计计数，每个大格的细胞量一样平常在30-50个之间时，计数结果会更加准确。这就意味着，细胞悬液浓度过高或过低都不利于得到准确的结果。多数情形下，我们须要对悬液进行有效的稀释。
其余，不仅操作成分会导致偏差涌现，本身血球计数板的设计对标准化的操作流程也有一定讲求。
据一项研究表明，在计数过程中，盖玻片的位置偏移可造成7.6%的计数差异[4]，不同品牌的盖玻片质量厚度对样品的均匀扩散也会有一定影响。同时血球计数板计数的视野面积也影响着计数的准确度，常用计数板进行普通细胞系计数时的计数面积为1mm2，取样面积越小，CV值越高、偏差越大[5]。并且，若血球计数板清洁过度、洗濯不到位或操作不当导致计数室存在划痕会对操作和结果都造成很大影响，被洗濯掉的细胞样本若欠妥善处理也会将操作者暴露在生物安全危险下。
计数板的计数面积
很多研究者已经逐渐利用机器的自动计数来代替手动计数，相对来讲各方面成分更好掌握，得出的结果可靠性更高，目前细胞计数的金标准仍为最为可靠的流式细胞术检测，但是其高昂的仪器价格和掩护本钱导致其遍及程度和覆盖情形还不是很广，以是自动细胞计数仪是目前性价比更高的办理方案。为什么自动细胞计数仪是自动计数最佳方案？
首先，机器计数可减少人工计数过程中造成的偏差，通过软件算法直接得到数据结果，个中图像式的计数仪还能天生清晰的样本图像进行保存，方便后续数据处理。
第二，机器自动计数后会根据相应的公式运算规则直接得出结果，并且还会内置赞助打算软件，将人为打算造成的偏差降到最小。
第三，相对来说机器计数对样品制备的哀求没那么高，由于技能和算法的差异，比手动计数能识别的浓度准确区间更大，样本的预稀释操作在一定程度上被简化，同时对难离散的细胞悬液中的聚团细胞进行分别识别并独立计数，提高对分布不屈均样品计数的准确度。
并且，机器计数一样平常利用相应的一次性耗材，不仅不须要盖玻片等额外的耗材，减少上样操作造成的样品扩散不均，继而影响计数结果，同时一次性耗材无需洗濯，担保重复性也避免了生物安全危害。其余图像式的计数仪的采样面积一样平常是人工计数的几倍，采样面积更大计入细胞更多、更准确。还有很多计数仪有荧光功能，不仅能完成正常的计数操作，还可对不同的荧光标记物进行识别统计。
瑞沃德自动细胞计数仪可对悬液中的细胞快速进行精准定量剖析，并同时显示明场及荧光图像，清晰呈现计数结果及细胞形态。计数面积更大，运用方位更广。适用于免疫学及疫苗开拓、细胞治疗、肿瘤研究、干细胞及代谢研究等研究领域的细胞剖析。
【参考文献】
[1] Freund M, Carol B. Factors Affecting Haemocytometer Counts of Sperm Concentration in Human Semen. Journal of Reproductive Fertility 1964; 8: 149-55.
[2] Davis JD. THE HEMOCYTOMETER AND ITS IMPACT ON PROGRESSIVE-ERA MEDICINE. Urbana: University of Illinois at Urbana-Champaign; 1995.
[3] Christensen P, Stryhn H, Hansen C. Discrepancies in the Determination of Sperm Concentration using Bürker-Türk, Thoma and Makler Counting Chambers. Theriogenology 2005; 63: 992-1003.
[4] Sanders C, Skerry DW. The Distribution of Blood Cells on Haemacytometer Counting Chambers with Special Reference to the Amended British Standards Specification 748 (1958). Journal of Clinical Pathology 1961; 14: 298-304.
[5]Ramsey JM. The Effects of Size of Sampling Area and Dilution on Leucocyte Counts in a Hemocytometer. The Ohio Journal of Science 1969; 69(2): 101-4.
